試薬 FAA(ホルマリン:氷酢酸:70% EtOH=1:1:18)要時調製
テクノビット7100予備浸漬液 (liquid : hardner I powder=100 ml:1 g)
包埋液 (予備浸漬液:hardener II=15:1)
1日目 (1 h)
固定 FAA(組織の20倍程度)に試料を入れる 5 ml アシストチューブ利用
バキューム 20 min
サンプルが浮かんでくるまで数分(泡が消えるまで,突沸注意)脱気後バルブを閉じて20 min放置、もしくは数分脱気後バルブを閉じ、ポンプをはずした後、すぐにバルブをリリース。サンプルがすべて沈むまで繰り返す。バルブのリリースは緩やかにしないと組織を痛める。
O/N
2日目 (5-9 h)
脱水 60% EtOH
80%
90%
99.8% x2
100% x2
各30 min – 1 h
前浸漬 100% EtOH : テクノビット7100予備浸漬液=1 : 1溶液 (1ml)1 h
予備浸漬 テクノビット7100予備浸漬液 O/N
3日目
包埋 包埋液を準備 (予備浸漬液:hardener II=15:1)
サンプルを包埋 重合硬化 RT O/N (1-2 hで硬化)
#空気を遮断することが重要
#ぬめりが残るときは60℃ 2 h
ヒストブロックへの固定
テクノビット3040を用いてサンプルとヒストブロックを固定 30 min
トリミング
切片作成
水で展伸、空気乾燥
染色観察